Kamis, 26 April 2012

Teknik Isolasi Fragmen Tunggal DNA pada DNA Rekombinasi


gfx pcr dna

Jurnal Penelitian Perikanan - Teknik Isolasi Fragmen Tunggal DNA pada DNA Rekombinasi - Isolasi fragmen tunggal DNA atau yang biasa dikenal dengan teknik elusi merupakan suatu teknik untuk memisahkan fragmen DNA obyek dari fragmen2 DNA yang bersifat sebagai pengotor. Proses elusi ini penting dalam suatu perlakuan rekayasa genetik, karena fragmen-fragmen yang sudah terpisah tsb dapat berfungsi sebagai pelacak yang digunakan untuk mendeteksi gen DNA lain, dan fragmen-fragmen DNA tersebut dapat dicangkokkan pada fragment dna lainnya.

Diperlukan beberapa tahapan untuk mendapatkan fragmen DNA yang terpisah dari fragmen DNA lainnya. Tahapan ke-1: dengan memisahkan fragmen yang akan di-isolasi dari fragmen lainnya dengan cara pemotongan menggunakan enzim hasil PCR atau enzim restriksi, diteruskan dengan tahap elektroforesis menggunakan gel agarose.

Tahapan selanjutnya adalah pendeteksian fragmen yang akan diisolasi dan memotong gel agarose yang mengandung fragment tersebut. Tahapan terakhir:mengisolasi fragmen DNA dari gel agarose dengan cara melewatkannya pada membran Hybon-N netral dan memberi larutan buffer elusi yang berisi Tris-buffer dan Sodium-dodesil Sulfat.

Saat ini sudah banyak perlatan (kit) yang dapat digunakan untuk mengisolasi DNA dari gel agarose, seperti: Gel Band Purification dan GFX PCR DNA Kit dari AmershamPharmaciaBiotech. Untuk keperluan praktikum, kegiatan ini dapat dilakukan isolasi DNA dari gel agarose dengan menggunakan metode yang relatif sederhana dan murah.

Selain itu juga dapat digunakan perlatan kit gel agarose menggunakan GFX PCR DNA dan Gel Band Purification Kit dari Amersham Pharmacia Biotech. Terdapat pula produk kit merk lain yang secara praktis dapat digunakan dalam praktek, dengan prosedur kerja (penggunaan) yang hampir sama.